科瑞斯生物—流式荧光染料分类【烟台科瑞斯】流式荧光染料（上）
一、 荧光蛋白

1. 蛋白质结构编码了荧光。这些荧光蛋白包括绿色荧光蛋白(GFP)、YFP、RFP和各种衍生物。

（1） 荧光蛋白始祖——绿色荧光蛋白

绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)，基于GFP晶体结构，通过定点或随机突变手段以期找到功能更强的GFP突变体。应用范围广的当属增强型GFP(EGFP)）和Emerald(祖母绿)，不稳定增强型绿色荧光蛋白(dEGFP)，增强型荧光蛋白(EYFP)，增强型蓝色荧光蛋白（EBFP)，增强型蓝绿色（青色）荧光蛋白(ECFP)等各种衍生型GFP，发出的荧光颜色各不相同。

（2） 红色荧光蛋白

GFP虽然用途广泛，但由于其发射光谱仅局限于440-529 nm,细胞内成像时背景较高,无法对活体生物皮下进行更深的荧光标记。与GFP相比，其激发和发射波长更长，在细胞内成像时背景低，并且红色荧光蛋白能够与GFP共同标记。

早用于研究的红色荧光蛋白是DsRed(发射峰在583nm)，来源于珊瑚，荧光强、稳定性好。DsRed易形成寡聚体，且成熟速度慢，DsRed的突变体有mBanana、mOrange、dTomato、mTangerine、mStrawberry和mCherry，其中mStrawberry和mCherry，发射峰分别为596nm和610nm，亮度分别为EGFP的75%和50%左右。

2. 衍生自在藻类和植物中发现的藻胆蛋白

这些蛋白质使用藻胆蛋白辅因子来吸收光能，包括藻红蛋白(PE)、别藻蓝蛋白(APC)和紫草素叶绿素(PerCP)。

特点:

具有较大的斯托克斯位移(75-200 nm)，并且具有稳定的发射光谱。 由于藻胆蛋白较大，因此它们在结合过程中通常具有1∶1的蛋白质与荧光染料比率，因此对于定量流式细胞术非常有用。易受光致漂白，不建议长时间或反复暴露于激发光源中。

二、 有机小分子

FITC(分子量389 Da) 、Alexa Fluor 488(FITC类似物，分子量643 Da) 、Texas Red(TMRed，分子量625 Da) 、Alexa Fluor647(分子量1155 Da) 、 Pacific Blue (分子量242 Da）和Cy5(分子量762 Da）等

特点:

具有一致的发射光谱和较小的斯托克斯位移（激发波长和发射波长之间的差，大约为50-100 nm)光稳定好，容易与抗体偶联，应用广泛。

三、 量子点

QDot是一种半导体，可以根据粒子的尺寸调整其不同的发射波长。

五种不同的量子点探针溶液显示为用相同的长波长UV灯激发；探针的大小决定颜色。 Qdot探针是纳米级(大约为蛋白质大小)的原子簇，包含数百至几千个原子的半导体材料(镉与硒或磅混合)，该材料已被另外的半导体壳（硫化锌）覆盖）以改善材料的光学性能。这些粒子发荧光的方式与传统荧光团完全不同，而没有电子跃迁的参与。

特点:

亮度高、光稳定性好。

QDots通常被紫激光激发，由于这些补偿问题难以解决，并且将Qdot结合到抗体上较为困难，所以这些试剂在多参数方案中大多被高分子染料取代。

四、 聚合物染料

Brilliant Violet(BV)、Brilliant Ultraviolet(BUV)和Brilliant Blue (BB)。

特点:

染料由收集光信号的聚合物链组成，可以根据聚合物链的长度和连接的分子亚基，“调节”吸收和发射特定波长的光。这些染料非常稳定，与藻胆蛋白具有相似的量子效率，光稳定性大大提高。

仅吸收特定波长的光，因此避免了Qdots存在的跨波长激发的问题。

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